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Quali sono le funzioni del kit ELISA?

2022-12-23

Il kit ELISA si basa sulla fase solida dell'antigene o dell'anticorpo e sulla marcatura enzimatica dell'antigene o dell'anticorpo. L'antigene o l'anticorpo legato alla superficie del supporto solido conserva ancora la sua attività immunologica, e l'antigene o l'anticorpo marcato con l'enzima conserva sia la sua attività immunologica che l'attività enzimatica. Al momento della determinazione, il campione in esame (in cui viene misurato l'anticorpo o l'antigene) reagisce con l'antigene o l'anticorpo sulla superficie del supporto solido. Il complesso antigene-anticorpo formato sul supporto solido viene separato dalle altre sostanze nel liquido mediante lavaggio.

Vengono aggiunti antigeni o anticorpi marcati con enzimi, che si legano anche al supporto solido per reazione. In questo momento, la quantità di enzima nella fase solida è proporzionale alla quantità di sostanza nel campione. Dopo aver aggiunto il substrato della reazione enzimatica, il substrato viene catalizzato dall'enzima per diventare prodotti colorati. La quantità del prodotto è direttamente correlata alla quantità della sostanza testata nel campione, quindi l'analisi qualitativa o quantitativa può essere effettuata in base alla profondità del colore.

L'elevata efficienza catalitica degli enzimi amplifica indirettamente i risultati della risposta immunitaria, rendendo il test altamente sensibile. ELISA può essere utilizzato per determinare gli antigeni, ma può anche essere utilizzato per determinare gli anticorpi.

Principi di base del kit ELISA
Utilizza la reazione specifica dell'antigene e dell'anticorpo per collegare l'oggetto all'enzima, quindi produce una reazione cromatica tra l'enzima e il substrato per la determinazione quantitativa. L'oggetto della misurazione può essere l'anticorpo o l'antigene.

Ci sono tre reagenti necessari in questo metodo di determinazione:
â Antigene o anticorpo in fase solida (immuno adsorbente)
∑ Antigene marcato con enzima o anticorpo (marcatore)
â¢ substrato per l'azione enzimatica (agente di sviluppo del colore)

Nella misurazione, l'antigene (anticorpo) viene prima legato al supporto solido, ma conserva ancora la sua attività immunitaria, quindi viene aggiunto un coniugato (marcatore) di anticorpo (antigene) ed enzima, che conserva ancora la sua attività immunitaria e l'enzima originari attività. Quando il coniugato reagisce con l'antigene (anticorpo) sul supporto solido, viene aggiunto il corrispondente substrato dell'enzima. Cioè, idrolisi catalitica o reazione e colore REDOX.

La sfumatura di colore che produce è proporzionale alla quantità di antigene (anticorpo) da misurare. Questo prodotto colorato può essere osservato ad occhio nudo, microscopio ottico, microscopio elettronico, può anche essere misurato mediante spettrofotometro (strumento etichetta enzimatica). Il metodo è semplice, conveniente, veloce e specifico.

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